二级种的培养与制备方法

二级种是将一级种移接到二级培养料中制成的菌种，经过适当的培养后，二级种可以直接作为生产种使用。通常情况下，二级种会在相同的培养料上进行扩大培养，最终成为生产种。常见的培养容器包括750毫升的蘑菇瓶或塑料袋。

培养料的配制方案

配方一：稻草基质

稻草占配方的90%，麸皮9%，以及石膏粉1%。选择金黄色、无霉的干稻草，切成约3厘米的小段，浸泡在清水中12小时，确保稻草充分吸水。浸泡后，捞出并挤去多余的水分，按比例加入麸皮和石膏粉，充分搅拌使其均匀。调配时，湿度应适中，握紧后有水珠流出为宜。随后将混合物装入瓶中，边装边用木棒压实，注意松紧均匀，一般750毫升的瓶中装75克干草。填充时，应留出约5厘米的瓶口空间以避免溢出。接着，用尖木棒在中央打一个小洞，以便后续接种工作。最后，清洁瓶口，塞上棉塞，进行灭菌处理。

配方二：棉籽壳基质

其材料包括94%的棉籽壳，5%的麸皮，1%的石膏粉和6%的石灰。将棉籽壳预湿后，加入辅料，确保含水量在60%左右即可装入瓶中或塑料袋。

配方三：麦粒基质

主要成分为98.5%的麦粒，1%的石膏粉和0.5%的碳酸钙。将麦粒用12%～15%的石灰水浸泡约10小时，煮沸15分钟后过滤，稍微晾干，冷却后加入石膏粉和碳酸钙，随即装瓶。瓶底可放一薄层湿度为30%～40%的砻糠，而瓶肩处铺一薄层棉籽壳或砻糠以减少杂菌污染。该方法适合制作二级种，而在制作生产种时，由于营养丰富，易引起污染。

灭菌程序

培养料装好后应立即进行灭菌，以免发酵变质。最佳灭菌压力在137～147千帕，处理时间为1.5到2小时。若采用常压灭菌设备，则需使水煮沸保持8小时，并闷一夜，亦可达到灭菌效果。

接种操作

灭菌后，需立即将菌种瓶取出并转移至接种箱或超净台，待冷却后即可进行接种。一般情况下，每支一级种可以接4到8瓶二级种，而每瓶二级种又可接60瓶左右的生产种。

菌种培养条件

接种完成后，将菌种整体移至培养箱或培养室中，适宜的温度为30至32摄氏度。在接种后24小时内，经常检查菌丝的生长情况，尤其在菌丝封口前，应集中精力及时剔除污染菌种。菌种在瓶中完全生长后，一般3至5天为最佳使用期，而750毫升蘑菇瓶中的菌龄为25到30天。需要特别强调的是，培养室内外环境必须保持清洁和通风，以确保菌种的健康生长。